紫外分光光度法測量蛋白質(zhì)的含量

紫外可見(jiàn)分光光度法是在190～760nm波長(cháng)范圍內測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當光穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長(cháng)不同而變化。因此，通過(guò)測定物質(zhì)在不同波長(cháng)處的吸光度，并繪制其吸光度與波長(cháng)的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長(cháng)λmax和最小吸收波長(cháng)λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結構相關(guān)的特征性。因此，可以通過(guò)特定波長(cháng)范圍內樣品的光譜與對照光譜或對照品光譜的比較，或通過(guò)確定最大吸收波長(cháng)，或通過(guò)測量?jì)蓚�(gè)特定波長(cháng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在最大吸收波長(cháng)處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數法求算出樣品溶液的濃度。

光譜法（spectrometry）是基于物質(zhì)與電磁輻射作用時(shí)，測量由物質(zhì)內部發(fā)生量子化的能級之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射的波長(cháng)和強度進(jìn)行分析的方法。光譜法可分為發(fā)射光譜法、吸收光譜法、散射光譜法；或分為原子光譜法和分子光譜法；或分為能級譜，電子、振動(dòng)、轉動(dòng)光譜，電子自旋及核自旋譜等。
分光光度法是光譜法的重要組成部分，是通過(guò)測定被測物質(zhì)在特定波長(cháng)處或一定波長(cháng)范圍內的吸光度或發(fā)光強度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用的技術(shù)包括紫外-可見(jiàn)分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法等。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng)，以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。在一定條件下，物質(zhì)的吸收系數是恒定的，且與入射光的強度、吸收池厚度及樣品濃度無(wú)關(guān)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸光度，即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定，故又稱(chēng)之為比色分析。
蛋白質(zhì)與生命的起源、存在和進(jìn)化都密切相關(guān),蛋白質(zhì)測定涉及到生產(chǎn)和利研的眾多領(lǐng)域。本試驗用紫外分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測定,由此分析此方法的特點(diǎn)及適用條件。結果表明,紫外吸收法簡(jiǎn)單、迅速,且相對較為準確,是測定低濃度蛋白質(zhì)含量的有效方法。
蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此，蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收峰位于280nm附近（不同的蛋白質(zhì)吸收波長(cháng)略有差別）。在最大吸收波長(cháng)處，吸光度與蛋白質(zhì)溶液的濃度的關(guān)系服從朗伯-比耳定律。該測定法具有簡(jiǎn)單靈敏快速高選擇性，且穩定性好，干擾易消除不消耗樣品，低濃度的鹽類(lèi)不干擾測定等優(yōu)點(diǎn)。

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